NEB可提供210多種內(nèi)切酶，其中有130多種內(nèi)切酶為重組酶。克隆及重組技術(shù)的運用，使NEB能在提高內(nèi)切酶的純度及品質(zhì)的同時，極大地削減生產(chǎn)費用，從而為用戶提供價格更合理、品質(zhì)更優(yōu)良的產(chǎn)品

T4 DNA 連接酶

特性

■  高效連接粘性末端和平末端
■  T/A 克隆
■  dsDNA 切刻修復(fù)
■  構(gòu)建高豐度克隆文庫
■  RNA 和 DNA 的連接

概述

該酶催化雙鏈 DNA 或 RNA 上相鄰的 5?-磷酸末端和 3?-羥基末端形成磷酸二酯鍵。該酶不僅能夠催化平齊末端或粘性末端之間的連接，還可以修復(fù)雙鏈 DNA、RNA 或 DNA/RNA 雜交雙鏈中的單鏈切刻。

來源

純化自 E. coli C600 pcl857 pPLc28 lig8。

反應(yīng)條件

1X T4 DNA 連接酶反應(yīng)緩沖液
[50 mM Tris-HCl（pH 7.5 @ 25℃），10 mM MgCl₂，10 mM DTT，1 mM ATP]。推薦 DNA 5? 末端濃度為 0.1-1.0 μM，16℃ 溫育。
熱失活：65℃ 10 分鐘。

質(zhì)保聲明

T4 DNA 連接酶經(jīng)過嚴(yán)格的質(zhì)控檢測，確保該產(chǎn)品具有zui高的活性和純度。

單位定義（粘性末端活性單位）

1 單位指在 20 μl 1X T4 DNA 連接酶反應(yīng)緩沖液中，16℃ 反應(yīng)條件下，30 分鐘能使 50% 的經(jīng) HindⅢ 消化的λDNA 片段 [ 5? 端濃度為 0.12 μM（300 μg/ml）] 連接所需的酶量。

濃度

400,000 units/ml 和 2,000,000 units/ml。

注意事項

與 E. coli DNA 連接酶需要 NAD+ 作輔因子不同，T4 DNA 連接酶的輔因子是 ATP。

稀釋后的 T4 DNA 連接酶應(yīng)于 -20℃、50% 甘油貯存緩沖液（稀釋緩沖液 A，NEB #B8001）中保存。如稀釋后馬上使用，也可用 1X T4 DNA 連接酶反應(yīng)緩沖液稀釋。

只要在反應(yīng)體系中補加 1 mM ATP，連接反應(yīng)就可以在 NEB 提供的四種限制性內(nèi)切酶緩沖液或在

T4 DNA 多聚核苷酸激酶反應(yīng)緩沖液中進(jìn)行。